細(xì)胞實(shí)驗(yàn)檢測
細(xì)胞劃痕
一、實(shí)驗(yàn)概念
細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)是一種操作簡單，經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的研究細(xì)胞遷移/腫瘤侵襲的體外試驗(yàn)方法。這種方法的原理是，當(dāng)細(xì)胞長到融合成單層狀態(tài)時，在融合的單層細(xì)胞上人為制造一個空白區(qū)域，稱為“劃痕”。劃痕邊緣的細(xì)胞會逐漸進(jìn)入空白區(qū)域使“劃痕”愈合?；镜牟襟E包括“劃痕”的制造，細(xì)胞遷移期間圖像的獲得以及后期數(shù)據(jù)的處理。
二、實(shí)驗(yàn)流程
細(xì)胞板畫線→接種細(xì)胞→用槍頭制造劃痕→培養(yǎng)適當(dāng)時間進(jìn)行拍照
三、注意事項(xiàng)
1.流式檢測樣本 |
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樣本形式 | 處理方式 |
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血樣 | 當(dāng)天采集的血液，置于抗凝管中，建議血量≥2mL，單個血樣對應(yīng)分組較多時應(yīng)適當(dāng)加大采血量 | 4小時之內(nèi)完成淋巴細(xì)胞分離 |
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組織 | 新鮮標(biāo)本離體后置于PBS中，4℃保存運(yùn)輸。離體時間不可超過24小時。 |
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細(xì)胞 | 武漢本地客戶可以將培養(yǎng)細(xì)胞的孔板交予銷售帶至實(shí)驗(yàn)室，需要用封口膜密封，防止漏液。外地客戶需將有活力的細(xì)胞置于培養(yǎng)瓶中常溫快遞至公司檢測 |
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注意事項(xiàng)： |
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2.其他檢測 |
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檢測形式 | 處理方式 | 保存 | 運(yùn)輸 |
流式細(xì)胞周期檢測 | 將細(xì)胞正常消化后，冷PBS懸浮細(xì)胞，之后緩慢加入4℃預(yù)冷無水乙醇固定，乙醇終濃度75% | -20℃ | 冰袋 |
流式細(xì)胞凋亡檢測 | 將細(xì)胞正常消化后，PBS洗一遍，PBS重懸 | 必須當(dāng)天送樣 | 冰袋 |
Tunel細(xì)胞凋亡檢測 | 有活力的細(xì)胞，棄去培養(yǎng)液，PBS沖洗后，加入足量4%多聚甲醛，培養(yǎng)板附上保鮮膜，蓋上板蓋，膠布纏裹固定，避免固定液體流出 | 4℃ | 冰袋 |
原代分離實(shí)驗(yàn) | 無菌采取完整的組織塊，新鮮組織離體后置于無菌培養(yǎng)基中 | 離體時間不可超過4小時 | 冰袋 |
血小板的分離 | 需要選擇醫(yī)用真空采血管獲得抗凝血，全過程樣本均需在20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果，最好在取血2h內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，血液存放時間越長，細(xì)胞分離效果越差。血液放置超過6h后分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。 | 4℃ | 冰袋 |