細(xì)胞實(shí)驗(yàn)檢測(cè)
血管形成實(shí)驗(yàn)
一、實(shí)驗(yàn)概念
血管形成體外模型可分為細(xì)胞水平的增殖實(shí)驗(yàn)、遷移實(shí)驗(yàn)和管腔形成實(shí)驗(yàn)，以及器官水平的人胎盤血管段培養(yǎng)模型和大鼠動(dòng)脈環(huán)模型。目前通常所說(shuō)的血管形成實(shí)驗(yàn)是指管腔形成實(shí)驗(yàn)。管腔形成反映毛細(xì)血管的早期過(guò)程，是體外檢查內(nèi)皮細(xì)胞功能最完整的指標(biāo)。
血管形成過(guò)程中內(nèi)皮細(xì)胞會(huì)形成細(xì)胞條索，然后形成管腔，體外在特定條件下如基質(zhì)膠、膠原等培養(yǎng)時(shí)也能形成管腔。藥物通過(guò)抑制管腔形成或使形成的管腔斷裂來(lái)達(dá)到抑制血管形成的作用。借助計(jì)算機(jī)軟件計(jì)算小管數(shù)及小管之間的連接數(shù)及小管的長(zhǎng)度和面積，可定量分析藥物對(duì)管腔形成的影響。
二、實(shí)驗(yàn)流程
細(xì)胞培養(yǎng)→細(xì)胞接種→加藥處理→結(jié)果分析
三、注意事項(xiàng)
1.流式檢測(cè)樣本 |
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樣本形式 | 處理方式 |
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血樣 | 當(dāng)天采集的血液，置于抗凝管中，建議血量≥2mL，單個(gè)血樣對(duì)應(yīng)分組較多時(shí)應(yīng)適當(dāng)加大采血量 | 4小時(shí)之內(nèi)完成淋巴細(xì)胞分離 |
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組織 | 新鮮標(biāo)本離體后置于PBS中，4℃保存運(yùn)輸。離體時(shí)間不可超過(guò)24小時(shí)。 |
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細(xì)胞 | 武漢本地客戶可以將培養(yǎng)細(xì)胞的孔板交予銷售帶至實(shí)驗(yàn)室，需要用封口膜密封，防止漏液。外地客戶需將有活力的細(xì)胞置于培養(yǎng)瓶中常溫快遞至公司檢測(cè) |
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注意事項(xiàng)： |
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2.其他檢測(cè) |
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檢測(cè)形式 | 處理方式 | 保存 | 運(yùn)輸 |
流式細(xì)胞周期檢測(cè) | 將細(xì)胞正常消化后，冷PBS懸浮細(xì)胞，之后緩慢加入4℃預(yù)冷無(wú)水乙醇固定，乙醇終濃度75% | -20℃ | 冰袋 |
流式細(xì)胞凋亡檢測(cè) | 將細(xì)胞正常消化后，PBS洗一遍，PBS重懸 | 必須當(dāng)天送樣 | 冰袋 |
Tunel細(xì)胞凋亡檢測(cè) | 有活力的細(xì)胞，棄去培養(yǎng)液，PBS沖洗后，加入足量4%多聚甲醛，培養(yǎng)板附上保鮮膜，蓋上板蓋，膠布纏裹固定，避免固定液體流出 | 4℃ | 冰袋 |
原代分離實(shí)驗(yàn) | 無(wú)菌采取完整的組織塊，新鮮組織離體后置于無(wú)菌培養(yǎng)基中 | 離體時(shí)間不可超過(guò)4小時(shí) | 冰袋 |
血小板的分離 | 需要選擇醫(yī)用真空采血管獲得抗凝血，全過(guò)程樣本均需在20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，最好在取血2h內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，血液存放時(shí)間越長(zhǎng)，細(xì)胞分離效果越差。血液放置超過(guò)6h后分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。 | 4℃ | 冰袋 |
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