實驗技巧
透射電鏡常見樣本保存及運輸方法
1、取材準備
1) 試劑 所需 2.5%戊二醛、0.1M PH7.35 的磷酸鹽緩沖液,注明配制日期及啟用日 期,置于 4 攝氏度冰箱預冷(2.5%戊二醛預冷至少 1 小時以上;磷酸鹽緩沖液不宜長時間預冷,容易結晶)。
2) 儀器與器材 鋒利刀片(手術刀片或飛鷹雙面刀片)、鑷子、低溫操作臺、1.5mlEP管、培養(yǎng)皿(或者硬紙卡,盛戊二醛用)、注射器(植物組織用)、冷凍離心機(細 菌、細胞、藻類等需要離心的樣品使用)
2、取材要求
1) 快取材動作要迅速,材料離體后 1min 鐘內必須進入戊二醛固定液,使組織、細胞盡可能保持原來生活狀態(tài),解剖器械要用鋒利的刀片(新的手術刀片或飛鷹雙面刀片)劃切,避免牽拉或擠壓,盡量減少取材中的機械損傷。(動物處死后 10min 內完成此步驟,時間越短越好?。?/p>
2) 準取材要準確 ①器官要準確; ②部位要準確:如觀察腎臟腎小球或腦神經(jīng)元需取皮質而不要取髓質, 觀察胰島盡量取胰尾。 ③胃腸道、皮膚、角膜、視網(wǎng)膜、耳蝸、骨骼肌等要注意方向性(橫切或縱切),取材成條狀(0.5mm×1mm×3mm),確保要觀察的部位在較長的切面上。
3) 冷取材過程應在 0~4 攝氏度的操作臺上操作(或者是冰上操作,但要注意切勿使組織直接接觸或貼近冰面,需要以操作面板隔離,以免操作時間過長而造成組織結冰出現(xiàn)冰晶損傷),所有器械、容器、2.5%戊二醛、PBS 需 4℃預冷足夠長的時間。
4) 小不定位組織大小為 1mm×1mm×1mm(盡可能小,可以更小為 0.5mm×0.5mm× 1mm),如肝、肺、脾等不需要看特定結構的非定位器官組織;定位組織如神經(jīng)、骨骼肌、腎、腦、腸、血管、胰島等組織取材大小為 0.5mm×1mm×3mm 的長條狀。