實驗技巧
IHC常見問題分析及處理
作者：admin2022-07-05 14:23
熱度：176
問題 | 原因 | 建議 |
結(jié)果中顯色過深 | 一抗?jié)舛冗^高或孵育時間過長 | 降低一抗?jié)舛然驕p少孵育時間 |
孵育溫度過高 | 室溫或4 ℃孵育 | |
HRP標記二抗孵育時間過長 | 縮短時間 | |
| IHC結(jié)果中非特異性顯色 | 石蠟切片脫蠟不徹底 | 延長脫蠟時間 |
操作過程中沖洗不充分 | 增加沖洗的次數(shù)與沖洗時間 | |
組織富含內(nèi)源性的生物素與過氧化物酶 | 使用相關(guān)試劑進行封閉 | |
發(fā)生抗原異位 | ||
蛋白封閉不充分 | 增加蛋白封閉時間 | |
IHC結(jié)果中顯色強度弱 | 一抗?jié)舛冗^低或孵育時間過短 | 增加一抗?jié)舛然蜓娱L孵育時間 |
試劑超過保質(zhì)期 | 實驗前確認試劑的保質(zhì)期 | |
操作過程沖洗過度 | 適度沖洗 | |
| IHC結(jié)果中無染色 | 組織中無目的抗原的表達 | |
一抗種屬來源與二抗不匹配 | 實驗前確認一抗的種屬來源 |