AD阿爾茲海默癥模型

原型物種:人

來源:物理方法和藥物

模式動物品系: SPF級SD大鼠，健康，雄性，體重為250g-300g。實驗分組:正常對照組、模型組、陽性藥組、受試藥組三個劑量組實驗周期: 4-6 weeks

建模方法

1、SD大鼠均采用1%成巴Bi妥鈉4ug/g腹腔內(nèi)注射麻醉，麻醉后繼而固定于腦立體定位儀廣o

2、按照大鼠腦立體定位圖譜，以前兇為零起點，前后3.5 mm處為穿刺點，中線右側(cè)旁開2mm，而后牙 科鉆鉆開顱骨，采用微量注射器自腦表面垂直進(jìn)針3mm，即: (AP= -3.5 mm,ML=2.0 mm,DV=3.0 mm)，雙側(cè)海馬CA1區(qū)緩慢勻速注射AB1-40各10 ug(1 uL)，留針5 min，退針后縫合傷口。3、造模后3d后，開始尾靜脈注射，注射生理鹽水，大鼠每只給藥100ul/次/d，連續(xù)給藥21d后，進(jìn)行水迷 宮行為學(xué)檢測。

模型評價

行為學(xué)檢測: 所有組別，于給藥后21d，進(jìn)行Morris水迷宮試驗，試驗分為定位航行實驗和空間探索實驗。

1.定位航行實驗:大鼠連續(xù)接受5天的訓(xùn)練，每天4次，每次時間間隔30min，記錄下大鼠從4個入水點和入水并找到平臺所需要的時間，即逃避潛伏期。4次潛伏期的平均成績作為當(dāng)日的最終結(jié)果進(jìn)入到最后統(tǒng)計

2.空間探索實驗:實驗的第6天，撤去平臺，從距離平臺的最遠(yuǎn)端入水后，將大鼠放入水中，記錄下30s內(nèi)大鼠的游泳軌跡，并觀察分析大鼠在目標(biāo)象限的停留時間，以及它的穿越平臺的次數(shù)。行為學(xué)結(jié)束后，將各組大鼠摘取全腦，冰上剝?nèi)バ∧X，將剩余部分左右對切，一半放入4%多聚J醒中固定，用于病理學(xué)檢測。另一半取海馬用于PCR和蛋白檢測。

組織病理學(xué)

1.尼氏染色海馬組織固定后石蠟切片，進(jìn)行尼氏染色，觀察海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)和數(shù)量。光學(xué)顯微鏡下，計數(shù)視野下每組大鼠同一部位的神經(jīng)元數(shù)量，作統(tǒng)計分析。2.免疫熒光染色免疫熒光染色，觀察海馬區(qū)AB1-40染色情況。熒光顯微鏡下，計數(shù)視野下每組大鼠同一部 位的陽性斑塊數(shù)量，作統(tǒng)計分析。3.TUNEL染色海馬組織進(jìn)行TUNEL染色，觀察神經(jīng)元凋亡情況。熒學(xué)顯微鏡下，計數(shù)視野下每組大鼠同 一部位的陽性染色數(shù)量，作統(tǒng)計分析。

標(biāo)志因子水平

1.RT-qPCR檢測收集海馬組織，提取RNA，反轉(zhuǎn)錄CDNA，PCR檢測caspase-3，Bc-2和Bax的表達(dá)。

2.Western-blot檢測收集海馬組織蛋白，檢測active-caspase-3，B-2和Bax的蛋白表達(dá)。

血管性癡呆模型

1、永久性結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈大鼠于實驗前 12  開始禁食,不禁水。

2、麻醉后將大鼠固定于實驗臺上,消毒后沿頸正中線切開皮膚約 4~5 cm,暴露并分離出雙側(cè)頸總動脈，此 時需注意避免損傷迷走袖經(jīng)，永久性結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈。3、若有對照組,則對照組大鼠只分離雙側(cè)頸總動脈而 不結(jié)扎,術(shù)后縫合皮膚、消毒并應(yīng)用抗生素。

4、有研究將此法改良為分次進(jìn)行的永久性結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈，即先結(jié)扎一側(cè)頸總動脈，3 ~7 d后再行結(jié) 扎對側(cè)頸總動脈。

5、由于大鼠側(cè)支循環(huán)具有個體差異性，因此結(jié)扎頸總動脈后所造成的卒中嚴(yán)重程度不同，腦血流量嚴(yán)重 不足時可導(dǎo)致大鼠死亡。 改良后的手術(shù)方法結(jié)扎一側(cè)頸總動脈后通過大腦側(cè)支循環(huán)逐步代償后再行結(jié)扎對側(cè)頸總動脈，不至于使腦 血流量驟然減少導(dǎo)致大鼠死亡。 該方法提高了大鼠存活率,但目前應(yīng)用較少,還需重復(fù)驗證該方法的穩(wěn)定性及可靠性。