基本介紹

病理學(xué)從研究對象區(qū)分，可以分為人體病理學(xué)和實(shí)驗(yàn)病理學(xué)，作為科研工作者，實(shí)驗(yàn)病理學(xué)是我們研究的主要方向。

實(shí)驗(yàn)病理學(xué)以實(shí)驗(yàn)動物模型、體外培養(yǎng)細(xì)胞、組織和器官為研究對象。動態(tài)的研究人體疾病的發(fā)生發(fā)展規(guī)律。

實(shí)驗(yàn)病理學(xué)的整體技術(shù)小編歸納為兩大類，一是制片技術(shù)、另一是染色技術(shù)。

下面將從這兩個方向?yàn)榇蠹易稣w介紹。

01制片技術(shù)

· 制片方法   

病理制片方法種類較多，如火棉膠切片、碳蠟切皮、石蠟切片、超薄切片、冷凍切片等等。

不同實(shí)驗(yàn)特點(diǎn)選擇不同的制片技術(shù)。

廣泛的制片技術(shù)為組織石蠟切片和組織冷凍切片。

· 組織石蠟切片   

在制備石蠟切片前，需要良好的樣本處理方式。

大多采用甲醛固定的方法，大家可以選擇10%中性福爾馬林固定液或者使用4%多聚甲醛固定液。

固定時間小編建議24-48h，盡量避免長時間的固定，可能造成抗原的丟失。

· 組織冷凍切片   

冷凍切片常用于特殊的染色技術(shù)，如油紅O染色、酶化學(xué)染色（線粒體、呼吸相關(guān)等等）及熒光類染色。

制備冷凍切片的樣本同樣需要良好的前處理，一般可以選擇與石蠟切片相同的樣本處理方式，另外可以直接將樣本液氮速凍，置于-80℃保存。

同樣不建議長期保存，減少抗原的丟失。

02染色技術(shù)

· 分類   

制備好的切片可以用于后續(xù)病理染色，通過染色更直觀的觀測到組織細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)、多肽、酶及蛋白質(zhì)含量的變化，達(dá)到準(zhǔn)確定位、定性和定量的研究目的。

隨著新技術(shù)新手段的出現(xiàn)，染色方法也不斷發(fā)展，但總結(jié)歸納起來，常見的病理染色技術(shù)可以分為五大類：常規(guī)染色、特殊染色、組織化學(xué)染色、免疫組織化學(xué)染色及原位雜交技術(shù)。

· 常規(guī)染色   

常規(guī)染色是基礎(chǔ)的病理染色方法，即蘇木素-伊紅染色（HE染色），通過兩種染料對細(xì)胞結(jié)構(gòu)的細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)染色呈現(xiàn)的不同顏色，進(jìn)而呈現(xiàn)整體組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)，通過與正常組織結(jié)構(gòu)形態(tài)的對比，分析組織疾病等的病理改變。

· 特殊染色   

特殊染色是對組織細(xì)胞中的特定結(jié)構(gòu)、成分進(jìn)行區(qū)分。特殊染色種類繁多，比如masson染色、Nissl染色。油紅O染色、天狼猩紅染色、PAS染色、Giemsa染色等等。通過不同染色方法呈現(xiàn)不同的結(jié)構(gòu)特征，如顯示纖維組成、神經(jīng)元尼氏體、脂質(zhì)的堆積、糖原的沉積、炎性細(xì)胞的種類等等。使得特殊染色成為病理染色及病理鑒定當(dāng)中十分重要的一種手段。由于特殊染色的種類之多，染料顏色之豐富，下面隨小編一起來欣賞欣賞這些多彩的特染世界。

· 組織化學(xué)染色   

組織化學(xué)染色是基于酶化學(xué)反應(yīng)的染色技術(shù)，對于大多數(shù)酶如線粒體酶、細(xì)胞色素氧化酶、乳酸脫氫酶、堿性磷酸酶等等均可以采用組織化學(xué)的染色方法進(jìn)行染色。該類染色為保證組織內(nèi)酶活性，通常都是使用冷凍切片進(jìn)行染色。

· 免疫組織化學(xué)染色   

免疫組織化學(xué)染色是常用的用標(biāo)記的抗體（或抗原）對細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原（或抗體）進(jìn)行定性、定位或定量檢測方法；通過顯色反應(yīng)之后，用顯微鏡、熒光顯微鏡觀察的染色方法。

根據(jù)顯色體系的不同可將免疫組織化學(xué)染色分為化學(xué)顯色法IHC及免疫熒光染色。由于熒光標(biāo)記物在不同波段下顯示的不同熒光，又發(fā)展出免疫熒光單染、免疫熒光雙染及多重免疫熒光染色，使得在同一組織下能夠同時顯現(xiàn)多個抗原或蛋白的表達(dá)情況。

· 原位雜交   

原位雜交（In Situ Hybridization）也稱為原位雜交組織化學(xué)，是指以特定標(biāo)記的已知核酸序列為探針，原位檢測細(xì)胞涂片或組織切片中核酸（DNA/RNA）的技術(shù)。常用的標(biāo)記物有放射性標(biāo)記物、生物素、地高辛、熒光標(biāo)記物，酶類等。通過顯微鏡或熒光顯微鏡進(jìn)行定位觀察。