1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：取適應(yīng)性飼養(yǎng)一周的健康SD大鼠，雌雄均可

2.術(shù)前器械及物品準(zhǔn)備（所有物品消毒備用）

1）干棉球，酒精棉球

2) 碘伏＋棉簽

3）小動(dòng)物麻醉機(jī)

4) 常規(guī)手術(shù)器械

5) 顯微手術(shù)器械

6）縫合包

7）小動(dòng)物呼吸機(jī)

8）6-0帶線(xiàn)縫合針

3.麻醉：麻醉前將呼吸機(jī)進(jìn)氣口連接麻醉機(jī)出氣口。大鼠在小動(dòng)物麻醉機(jī)箱體內(nèi)預(yù)麻醉；

4.預(yù)麻醉后將大鼠以仰臥位固定在解剖板上，戴好麻醉機(jī)面罩，頸中部備皮，消毒；

5.沿頸部正中切開(kāi)皮膚，鈍性分離皮下組織，在分離過(guò)程中會(huì)看到頜下腺，將腺體輕輕推到一側(cè)，分離到氣管前肌后，沿右側(cè)胸鎖乳突肌腱向下分離，見(jiàn)到頸動(dòng)脈鞘后可用拉鉤將皮膚肌肉固定好。此時(shí)可見(jiàn)到頸總動(dòng)脈，小心向頭側(cè)跟心側(cè)剝離勁動(dòng)脈跟其隨行的神經(jīng)，注意動(dòng)作要輕，不要損傷神經(jīng)；

6.剝離到頭側(cè)約0.5cm時(shí)可以看到頸總動(dòng)脈分成頸內(nèi)動(dòng)脈跟頸外動(dòng)脈，繼續(xù)剝離2根血管跟神經(jīng)，此時(shí)用預(yù)先準(zhǔn)備好的血管夾夾閉頸總動(dòng)脈（盡量靠心端），準(zhǔn)備好的一根絲線(xiàn)結(jié)扎死頸外動(dòng)脈（盡量遠(yuǎn)離分叉處），另外一根套在頸外動(dòng)脈（接近分叉處）打活結(jié)備用。用血管夾夾閉頸內(nèi)動(dòng)脈；

7.將大鼠手術(shù)部位移至體視鏡下，用顯微剪在頸外動(dòng)脈上斜行剪一個(gè)小口，用顯微鑷夾起MCAO線(xiàn)拴從血管上的小口穿入血管，穿到分叉處時(shí)輕輕提起結(jié)扎頸外動(dòng)脈的絲線(xiàn)，待線(xiàn)拴進(jìn)入頸內(nèi)動(dòng)脈，稍微拉緊之前打活結(jié)的絲線(xiàn)，松開(kāi)血管夾，繼續(xù)向里面推送線(xiàn)拴，插入至顱內(nèi)微感阻力時(shí)拉緊活結(jié)；

8.缺血90分鐘后，拔出線(xiàn)栓，把活結(jié)扎死?？p合肌肉跟皮膚。并進(jìn)行尾靜脈注射，24h后取材。

目前實(shí)驗(yàn)室較多采用MCA阻斷0min、90min和120min的短暫腦缺血-再灌注模型，研究多種藥物對(duì)MCAO的治療效果和分子機(jī)制，取材后檢測(cè)TTC判斷造模情況以及大鼠神經(jīng)功能評(píng)分；

常規(guī)研究MCAO模型的動(dòng)物分組方法如下：

1. 假手術(shù)組

2. MCAO模型組

3. MCAO模型組+給藥組

4. MCAO模型組+SIRNA組（腺相關(guān)病毒注射）

一般給藥方式可以為：灌胃、尾靜脈注射、腹腔注射等；可以根據(jù)試劑的情況調(diào)整給藥頻次和方式；甚至也可以先給藥幾天以后再造模也可以；

另外一種腺相關(guān)病毒注射：目的是為了在動(dòng)物體內(nèi)讓某種蛋白表達(dá)量上升或者下降，用于研究相關(guān)分子機(jī)制的；

模型結(jié)束后取樣檢測(cè)，進(jìn)行藥物治療效果評(píng)估以及可能相關(guān)的分子機(jī)制。

1. TTC檢測(cè)；

2. QPCR檢測(cè)；

3. WB檢測(cè)；

4. 神經(jīng)功能評(píng)分；

5. 行為學(xué)檢測(cè)：比如平行木實(shí)驗(yàn)、爬繩實(shí)驗(yàn)等；

6. 組學(xué)檢測(cè)