實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目
流式細(xì)胞檢測
一、實(shí)驗(yàn)概念
流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry, FCM)是一項(xiàng)新型的 、發(fā)展迅速的生物醫(yī)學(xué)分析技術(shù),它是集激光技術(shù) 、光電測量技術(shù)、 計(jì)算機(jī)技術(shù)、 流體力學(xué)以及細(xì)胞免疫熒光化學(xué)技術(shù) 、單克隆抗體技術(shù)為一體的新型高科技細(xì)胞分析技術(shù)。 流式細(xì)胞儀是應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)建立起來的儀器裝置。它使細(xì)胞或微粒在液流中流動,逐個通過一入射光束,并用高靈敏度檢測器記錄下散射光及各種熒光信號,從而得以對粒子進(jìn)行多參數(shù)分析,包括諸如粒子形狀和大小、 細(xì)胞周期、 細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子、 細(xì)菌表面抗原、細(xì)胞DNA內(nèi)含物等。FCM檢測的粒子一般為活性細(xì)胞,通過激光光源激發(fā)細(xì)胞上所標(biāo)記的熒光物質(zhì)的強(qiáng)度和顏色以及散射光的強(qiáng)度可以得到細(xì)胞內(nèi)部各種各樣的生物信息。另外FCM還可進(jìn)行細(xì)胞分選,可以根據(jù)所檢測細(xì)胞的某種性質(zhì)進(jìn)行分選,并且如果分選的過程是在無菌條件下進(jìn)行的,這些細(xì)胞還可以用來培養(yǎng)?？瓢萆锞哂胸S富的流式檢測經(jīng)驗(yàn)，從單色熒光標(biāo)記到多色熒光標(biāo)記，從凋亡、周期到MPTP、CFSE等，從流式分析到流式分選，可提供全面的流式檢測服務(wù)。
二、實(shí)驗(yàn)流程
細(xì)胞培養(yǎng)及處理→熒光標(biāo)記（探針、抗體等）→上機(jī)檢測/流式分選→流式數(shù)據(jù)分析
三、注意事項(xiàng)
1.流式檢測樣本 |
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樣本形式 | 處理方式 |
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血樣 | 當(dāng)天采集的血液，置于抗凝管中，建議血量≥2mL，單個血樣對應(yīng)分組較多時應(yīng)適當(dāng)加大采血量 | 4小時之內(nèi)完成淋巴細(xì)胞分離 |
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組織 | 新鮮標(biāo)本離體后置于PBS中，4℃保存運(yùn)輸。離體時間不可超過24小時。 |
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細(xì)胞 | 武漢本地客戶可以將培養(yǎng)細(xì)胞的孔板交予銷售帶至實(shí)驗(yàn)室，需要用封口膜密封，防止漏液。外地客戶需將有活力的細(xì)胞置于培養(yǎng)瓶中常溫快遞至公司檢測 |
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注意事項(xiàng)： |
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2.其他檢測 |
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檢測形式 | 處理方式 | 保存 | 運(yùn)輸 |
流式細(xì)胞周期檢測 | 將細(xì)胞正常消化后，冷PBS懸浮細(xì)胞，之后緩慢加入4℃預(yù)冷無水乙醇固定，乙醇終濃度75% | -20℃ | 冰袋 |
流式細(xì)胞凋亡檢測 | 將細(xì)胞正常消化后，PBS洗一遍，PBS重懸 | 必須當(dāng)天送樣 | 冰袋 |
Tunel細(xì)胞凋亡檢測 | 有活力的細(xì)胞，棄去培養(yǎng)液，PBS沖洗后，加入足量4%多聚甲醛，培養(yǎng)板附上保鮮膜，蓋上板蓋，膠布纏裹固定，避免固定液體流出 | 4℃ | 冰袋 |
原代分離實(shí)驗(yàn) | 無菌采取完整的組織塊，新鮮組織離體后置于無菌培養(yǎng)基中 | 離體時間不可超過4小時 | 冰袋 |
血小板的分離 | 需要選擇醫(yī)用真空采血管獲得抗凝血，全過程樣本均需在20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得最.佳的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，最好在取血2h內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，血液存放時間越長，細(xì)胞分離效果越差。血液放置超過6h后分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。 | 4℃ | 冰袋 |