分子實(shí)驗(yàn)
ELISA檢測(cè)
一、實(shí)驗(yàn)概念
酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzyme linked immunosorbent assay，簡(jiǎn)寫(xiě)ELISA）指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體特異性結(jié)合進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法。酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）為免疫學(xué)中的經(jīng)典實(shí)驗(yàn)。
二、實(shí)驗(yàn)流程(具體步驟以說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)):
取出ELISA試劑盒→封閉→洗滌→加入一抗→洗滌→加HRP標(biāo)記的二抗→洗滌→底物顯色→加入終止液→酶標(biāo)儀讀數(shù)→數(shù)據(jù)分析
三、樣本要求
樣本形式 | 處理方式 | 保存 | 運(yùn)輸 |
血清 | 干燥管（黃色）或促凝管（紅色）收集全血，室溫自然凝固10-20min，離心5-10min（2500-3500rpm/min）。采血過(guò)程中應(yīng)避免溶血，仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心 | -20℃或更低 | 冰袋或干冰 |
血漿 | 抗凝管（紫色、黑色、綠色）收集全血，采集后馬上混勻，靜置10min左右，離心5-10min（2500-3500rpm/min）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心 | -20℃或更低 | 冰袋或干冰 |
尿液 | 用無(wú)菌管收集，離心10-20min（2500-3500rpm/min），仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心 | -20℃或更低 | 冰袋或干冰 |
糞便 | 用無(wú)菌15ml離心管收集, 1g樣本+9ml PBS（0.01M，pH=7.4），充分勻漿完離心5-10min（2500-3500rpm/min），取上清備用 | -20℃或更低 | 冰袋或干冰 |
胸腹水、腦脊液、肺泡灌洗液 | 同尿液 | -20℃或更低 | 冰袋或干冰 |
細(xì)胞 | 檢測(cè)分泌性的成份：用無(wú)菌管收集，5-10min（2500-3500rpm/min），仔細(xì)收集上清 | -20℃或更低 | 冰袋或干冰 |
| 細(xì)胞內(nèi)指標(biāo)：吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基，胰酶消化細(xì)胞，收集細(xì)胞沉淀，PBS（0.01M，PH=7.4）清洗一次，PBS稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到1×107個(gè)/ml左右，充分研磨后超聲裂解（或反復(fù)凍融），以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份，離心5-10min（2500-3500rpm/min），取上清備用 |
|
|
動(dòng)物組織 | 用無(wú)菌15ml離心管收集, 組織重量不能低于50mg，1g組織加入9ml PBS（0.01M，PH=7.4），手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分，勻漿過(guò)程中，PBS分2次加進(jìn)去，這樣勻漿更充分。充分勻漿完離心5-10min（2500-3500rpm/min）。取上清備用（切勿加入細(xì)胞裂解液） | -20℃或更低 | 冰袋或干冰 |
植物組織 | 用無(wú)菌15ml離心管收集, 組織重量不能低于50mg，1g組織加入9ml PBS（0.01M，PH=7.4），手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分，勻漿過(guò)程中，PBS分2次加進(jìn)去，這樣勻漿更充分。充分勻漿完離心5-10min（2500-3500rpm/min）。取上清備用（切勿加入細(xì)胞裂解液） | -20℃或更低 | 冰袋或干冰 |
牛奶 | 8000轉(zhuǎn)高速離心，離心后分三層，第一層是脂肪層，中間層是乳清，底層是固態(tài)蛋白，取中間層保存?zhèn)溆?。乳清量參照血清量。 | -20℃或更低 | 冰袋或干冰 |
注意事項(xiàng)： | |||
血常規(guī)樣本為EDTA-K2抗凝的全血樣本，抗凝管紫色頭蓋管，收集混勻不能凝血，樣本量不能少于0.2ml。當(dāng)天檢測(cè)，此檢測(cè)為全套結(jié)果，不單獨(dú)檢測(cè)某一項(xiàng)或者幾項(xiàng)。 | |||